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詳細(xì)介紹MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒的操作步驟

更新時間:2023-02-13   點擊次數(shù):1150次
  MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用于由誘導(dǎo)劑和抑制劑引起的細(xì)胞增殖活性變化的體外檢測,也可以用于一些生物活性因子的活性檢測、藥物篩選、細(xì)胞毒性測定等。
 
  MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒含有足夠的試劑用于評估在96孔板中進行960次測定或在24孔板中進行192次測定。細(xì)胞可以被鍍,然后用影響增殖的化合物或藥劑。然后用增殖試劑檢測細(xì)胞,在活細(xì)胞中由黃色四唑MTT轉(zhuǎn)化為紫色福爾馬贊形式細(xì)胞還原酶。
 
  MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒的操作步驟:
 
  1、制備含有0.1-1.0x106的細(xì)胞懸液培養(yǎng)基中的細(xì)胞/ml。
 
  2、將每孔100μL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)物中有或沒有待測化合物的板。細(xì)胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。
 
  3、加入10μlCytoSelect™MTT細(xì)胞增殖測定試劑,如果使用96-孔板,或24孔板的每個孔50µL。
 
  4、在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時,直至可見紫色沉淀(細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物)。
 
  5、在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液,或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤子。
 
  6、在室溫下孵育2小時至避光過夜。
 
  注意:在井中與洗滌劑溶液長時間孵育可能導(dǎo)致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀,將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。
 
  7、使用540-570nm作為主波長讀取吸光度。

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