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油紅o染色液的染色步驟及其注意事項(xiàng)分析

更新時(shí)間:2022-12-12   點(diǎn)擊次數(shù):3630次
  油紅o染色液的染色步驟:
 
  1、先小心輕緩倒去培養(yǎng)夜。
 
  2、用pbs輕緩漂洗(不洗沒(méi)問(wèn)題)。
 
  3、加10%中性甲醛固定30min(實(shí)際固定時(shí)間過(guò)夜都沒(méi)問(wèn)題。固定液用95%酒精也)。固定的是細(xì)胞膜。
 
  4、稀釋油紅儲(chǔ)存液,油紅:去離子水=3:2,濾紙過(guò)濾,室溫放置10min(除去一些雜質(zhì),染色結(jié)果更清晰)
 
  5、染色10min左右,加的體積覆蓋住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml(實(shí)際染色時(shí)間1小時(shí)都可以)。
 
  6、脫色,用75%酒精/60%異丙醇漂洗,除去多余的染料(實(shí)際用其他平衡液洗也沒(méi)問(wèn)題,背景并不會(huì)殘留多少)
 
  7、復(fù)染,淡蘇木染色115分鐘,pbs漂洗(這一步不做也可,看試驗(yàn)需要,并且蘇木素會(huì)把胞漿染紅,如要顯示核,hoechst33342也可以,濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)。
 
  8、甘油明膠封片(封片后可長(zhǎng)期保存)。
 
  9、顯微鏡觀察。
 
  油紅o染色液的染色注意事項(xiàng):
 
  (1)脂肪油紅染色,有的是動(dòng)物/人體脂肪組織切片,或細(xì)胞爬片。
 
  (2)成熟飽滿(mǎn)的脂肪細(xì)胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以壓片,切片都要考慮到這個(gè)問(wèn)題。
 
  (3)細(xì)胞爬片細(xì)胞溶液脫落,特別是脂滴大的。操作務(wù)要輕柔。不要把細(xì)胞沖掉。
 
  (4)如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍溫度比普通要低,切片厚度加厚。

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